ВВЕДЕНИЕ.
Снижение парциального давления кислорода с последующим развитием в организме гипоксического состояния имеет широкое распространение как в области патологии, так и в нормальных условиях существования [1]. В целях профилактики и коррекции эндогенных гипоксий часто используется некоторые параметры положительного влияния пониженного барометрического давления [2]. Придается большое значение применению адекватного кислородного голодания организма в для активации адаптивных механизмов [3,4]. В процессе контроля над уровнем развития гипоксии в организме находят широкое применение гематологические тесты, в частности, по состоянию эритроцитопоэза [5,6,7]. Количественные и качественные параметры со стороны ретикулоцитов крови в оценке состояния организма являются показателями взаимоотношения эритроцитопоэза и эритродиэреза в процессе регенерации красной крови. Исходя из этого в данном исследовании целью ставилось изучение состояния ретикулоцитов, как прекурсоров эритроцитов, а также и как показателя уровня эритроцитопоэзаа в условиях острой барокамерной гипоксии.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалом исследования явились ретикулоциты периферической крови кроликов. При этом изучалась ответная реакция эритроцитопоэза на действие кратковременной барокамерной гипоксической гипоксии. Разряжение воздуха, соответствовало 5-7 тыс. м. высоты. Экспозиция составляла 24 часа. Изучение морфологических изменений ретикулоцитов проводилось в исходном состоянии перед опытом, через 3, 7, 12, 24 часа пребывания в барокамере, а также в после опытный период - на 1,2,3,4,5 сутки. Количество ретикулоцитов периферической крови определялось в мазках крови, окрашенных суправитально по методу Сейфарза относительно из расчета на 1000 эритроцитов в единицах промилли (%0) .
Определение математической значимости различий количественных показателей проводилось параметрически по t– критерию Стьюдента по программе М. Exell «Cтатистика».
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Изучение ретикулоцитарной реакции крови кроликов в условиях пребывания в барокамерной гипоксии было предпринято для установления возможных изменений эритропоэтического ростка в красном костном мозге. Ретикулоциты представляют собой прекурсорыв зрелых эритроцитов. Согласно общепринятым положениям о гемопоэзе количественные и качественные сдвиги со стороны предшественников зрелых форменных элементов, циркулирующих в периферической крови, отражают характер регенеративного процесса, в частности, повышение содержания их указывает на "омоложение" популяций клеток, т.е. ускорение процесса обновления.
В процессе наших опытов были отмечены достоверные сдвиги в состоянии ретикулоцитов периферической крови. Эти изменения касались относительного количества их по отношению к содержанию эритроцитов крови, а также качественных, то есть, морфологических сдвигов в составе самих ретикулоцитов.
Наблюдаемые количественные изменения ретикулоцитов, а также распределение различных их форм в ретикулоцитарной формуле в динамике острой барокамерной гипоксии носили в целом фазовый характер (табл.1, рис.1).
Таблица 1
Количество ретикулоцитов в мазках крови ((в %о, M±m, n - 10))
|
Сроки опытов |
Относительное число |
|
Исходный уровень (норма) |
30,5±0,31 |
|
Через 3 часа пребывания в камере |
29,4±0,25* |
|
После 7 часов пребывания в камере |
31,5±0,27 |
|
После 12 часов пребывания в камере |
38,6±0,23* |
|
Через 24 часа пребывания в камере |
40,5±0,25* |
|
На 1 сутки после опыта |
50,5±0,25* |
|
На 2 сутки после опыта |
46,5±0,24* |
|
На 3 сутки после опыта |
41,1±0,22* |
|
На 4 сутки после опыта |
36,5±0,21* |
|
На 5 сутки после опыта |
30,1±0,9 |
При этом в первые часы пребывания кроликов в барокамере наблюдалось значимое снижение относительного числа ретикулоцитов, а в последующие сроки пребывания, наоборот, прогрессирующее повышение их количества
Рис.1. Различные формы ретикулоцитов по уровню дифференциации периферической крови кролика через 24 часа пребывания в барокамере.
1-Венчикообразный ретикулоцит. 2-глыбкообразный ретикулоцит. 3-полносетчатый ретикулоцит. 4-неполносетчатый ретикулоцит. 5-пылевидный ретикулоцит.
Суправитальная окраска мазка крови краской бриллиант крезил голубой по методу Сейфарза.
Рис.2. Сводная ретикулоцитарная формула (%о).
Ряд 1-исходный уровень. Ряд 2-после 24 час. гипоксии.
1-венчикообразные ретикулоциты. 2-глыбкообразные ретикулоциты. 3-полносетчатые ретикулоциты.4-неполносетчатые ретикулоциты.5-пылевидные ретикулоциты.
Параллельно была изучена ретикулоцитарная формула у контрольных и гипоксических животных ( рис. 1, 2).
При анализе ретикулоцитарной формулы (по Гейльмейеру) в зависимости от густоты и расположения базофильного сетчато-зернисто-нитчатого вещества ретикулоциты были подразделены на следующие 5 групп (рис.1).
В 1 группе базофильное вещество в цитоплазме располагалось в виде венчика. Это «венчикообразные» преимущественно ядросодержащие ретикулоциты, в основном, являлись нормобластами.
У 2 группы базофильное вещество цитоплазмы имело вид клубка. Клетки содержали густую, петлистой формы сетчатую субстанцию, лежащую обычно с включенными в нее глыбками. Такие ретикулоциты в литературе носят название «клубнообразных» или «глыбкообразных» .
Клетки 3 группы характеризовались сетчатой формой прижизненно красящейся субстанции. Петли сеточки были широкими и занимали почти всю цитоплазму. Это «полносетчатые» ретикулоциты.
К 4 группе были отнесены ретикулоциты с нитчатой формой базофильного вещества, имеющего характер как бы разорванной сетки, лежащей обычно у периферии клетки. Подобные ретикулоциты были названы «неполносетчатыми».
5 группу составляли ретикулоциты с зернистой формой субстанций или с одиночными, очень нежными и тонкими ниточками. Такие элементы красной крови обычно носят название «пылевидных».
Ретикулоцитарная формула в норме характеризовалась, в основном, наличием 2, 3, 4 и 5 групп ретикулоцитов. Единичные ретикулоциты 1 группы встречались редко (0-1%). 2 группа составляла от 0 до 3%, в среднем 2,5%. 3 группа ретикулоцитов колебалась от 6 до 11%, в среднем равнялась 8,1%. 4 группа имела вариации от 21 до 26 %, а среднее арифметическое значение составляло 24,1%. Ретикулоциты 5 группы у разных кроликов находились в пределах от 63 до 67%; среднее значение соответствовало 65,3%. Коэффициент сдвига ретикулоцитарной формулы, определяемый отношением суммы числа 1, 2, 3, 4 групп ретикулоцитов к числу ретикулоцитов 5 группы, в среднем равнялся 0,53.
В условиях эксперимента отмечалась тенденция к сдвигу ретикулоцитарной формулы влево за счет повышения относительного содержания более молодых форм ретикулоцитов. Так, после 3-часового пребывания животных в барокамере наступали относительно небольшие изменения в составе ретикулоцитов различных групп. Так же как и в норме выявлялись 4 (2, 3, 4, 5) группы. Во второй группе отмечалось некоторое повышение содержания клеток. Последнее составляло 0-6%. Среднее арифметическое значение равнялось 4,1%. Число ретикулоцитов третьей группы также повысилось и соответствовало 10-15%, а в среднем - 12,9%. Четвертая группа ретикулоцитов, подвергаясь таким же изменениям, находилась в пределах от 21% до 26%. Среднее значение соответствовало 24,9%. В пятой группе ретикулоцитов происходили изменения обратного характера; отмечалось уменьшение относительного содержания их; оно колебалось от 56% до 60%. Среднее арифметическое значение составляло до 58,1%. Коэффициент сдвига, выведенный в этот срок, показывал высокий сдвиг влево; он равнялся 0,72. Наблюдаемые сдвиги носили математически значимый характер.
Анализ ретикулоцитарной формулы через 7 часов пребывания в условиях гипоксии показывал дальнейший сдвиг ее в сторону молодых форм, т.е. «влево». Появлялась первая группа ретикулоцитов – «венчикообразные» ядросодержащие эритроциты и они составляли 0-2%, а в среднем 0,2%. Количество второй группы ретикулоцитов достигло 1-5%, со средним значением 3,8%. Третья группа молодых зернистых эритроцитов также увеличивалась и в среднем равнялась 20,1%, а колебания находились в пределах 18-22%. Четвертая и пятая группы ретикулоцитов уменьшались в количестве и соответственно имели колебания 19%-23%, 53%-57%, а в среднем – 21,1% и 54,9%. Естественно, уменьшение содержания четвертой и пятой групп происходило за счет увеличения трех других групп ретикулоцитов. Это обстоятельство имело определенное отражение и в состоянии коэффициента сдвига, который в это время, показывая дальнейший сдвиг влево, равнялся 0,82. Эти отмеченные изменения со стороны ретикулоцитарной формулы в этот срок были достоверными.
Исследование ретикулоцитов крови кроликов после их 12-часового пребывания в барокамере показало аналогичные по характеру, но более выраженные по степени, значимые изменения по сравнению с предыдущим сроком. Повысилось содержание ретикулоцитов 1, 2, 3 групп, и соответственно уменьшилось количество элементов 4 и 5 групп. Среднее арифметическое значение ретикулоцитов первой группы достигло 1,4% с колебаниями от 0 до 2%. Средние значения ретикулоцитов второй и третьей групп равнялись 17,3% и 24,9%, а колебания соответственно составляли 12-19%, 22-27%. Относительное содержание четвертой и пятой групп ретикулоцитов постепенно понижалось и в среднем равнялось соответственно 19,8% и 36,6%. Колебания находились в пределах 18-21% и 36-40%. Коэффициент сдвига достигал 1,11, показывая сдвиг ретикулоцитарной формулы «влево».
К концу пребывания животных в условиях гипоксии, т.е. через 24 часа, в ретикулоцитарной формуле также отмечался математически значимый высоко выраженный сдвиг «влево». Ретикулоциты первой группы, продолжая численно увеличиваться, достигли в среднем 1,6%, а колебания их составляли 0-2%. Среднее арифметическое значение форменных элементов второй и третьей групп равнялось соответственно 17,9% и 23,1%. Диапазон вариации числа ретикулоцитов в этих группах находился в пределах 12-19% и 20-26%. Со стороны числа ретикулоцитов четвертой и пятой групп отмечалась некоторая тенденция к изменению в сторону постепенного обратного увеличения, по сравнению с предыдущим сроком. Так, количества их в это время равнялись соответственно 18-21% и 36-40%, а в среднем 20,3% и 37,1%. Коэффициент сдвига равнялся 1,08, отражая определенный сдвиг «влево». Имеющиеся изменения средних числовых показателей носили статистический значимый характер.
Постэкспериментальный период характеризовался, в основном, постепенным возвращением показателей ретикулоцитарной формулы к норме. Продолжительность этого периода находилась в пределах от 3 до 5 суток. В первые сутки после опыта относительное содержание ретикулоцитов первой группы оставалось на уровне конца эксперимента, т.е. в среднем составляло 0,9%, а колебания соответствовали 0-1%. В этот же срок со стороны второй группы отмечалось незначительное снижение количества ретикулоцитов, оно равнялось 3-10%, а в среднем – 7,7%. Содержание ретикулоцитов третьей группы в это время, несколько снижаясь, достигало в среднем 21,1%; колебания составляли 19-23%. Четвертая и пятая группа характеризовались постепенным повышением числа ретикулоцитов и соответственно равнялись 17-21% и 48-51%. Среднее арифметическое значение их составляло 20,7%, 49,6%. Коэффициент сдвига ретикулоцитарной формулы испытывал некоторое снижение (1,00). Наблюдаемые сдвиги на этот срок были математически значимыми. На вторые сутки послеопытного периода продолжалось дальнейшее уменьшение числа ретикулоцитов первой, второй и третьей групп, и одновременно - повышение количества четвертой и пятой групп ретикулоцитов. Ретикулоциты первой группы колебались от 0 до 1%. Среднее арифметическое значение их составляло 0,3%. Диапазон колебаний во второй группе равнялся 2-9%, а в среднем – 6,3%. Третья группа содержала 12-20% ретикулоцитов со средним значением 16,9%. В четвертой и пятой группе покзатели соответственно равнялись 20-24% и 53-57%; средние арифметические значения их составляли 24,4% и 55,1%. Коэффициент сдвига соответствовал 0,83, что указывало на сохранение в этот срок еще определенного сдвига ретикулоцитарной формулы «влево». Имеющиеся изменения в ретикулоцитарной формулы в это время были статистически достоверными.
На третьи сутки постэкспериментального периода ретикулоцитарная формула, продолжая нормализоваться, еще сохраняла небольшой сдвиг «влево». В это время ретикулоциты первой группы встречались реже (0-2%), количество таких клеток второй группы составляло 1-6%, в среднем – 4,1%. Третья группа ретикулоцитов постепенно начала снижаться и находилась в пределах 20-24%; среднее арифметическое значение равнялось 21,9%. Содержание ретикулоцитов пятой группы продолжало повышаться и в это время составляло 55-59% со средним значением – 57,3%. Коэффициент сдвига ретикулоцитарной формулы указывал на снижение степени сдвига «влево» и соответствовал 0,74. Приведенные выше сдвиги средних числовых показателей носили еще статистический значимый характер.
Четвертые и пятые сутки послеопытного периода были характерны возвращением всех описываемых показателей ретикулоцитарной формулы в близкое к исходным уровням состояние. Относительное содержание разных групп ретикулоцитов, особенно среднее значение их, отличалось от нормы незначительно. Коэффициент сдвига на 4 и 5 день равнялся соответственно 0,66 и 0,49. Отмеченные сдвиги не имели статистический значимый характер.
Таким образом, было установлено, что в первые часы острой гипоксии количество ретикулоцитов снижалось, что указывало на угнетение эритроцитопоэза. В последующие сроки гипоксии наблюдалось повышение числа ретикулоцитов, обусловленное активацией дифференциации эритроцитов. Восстановление исходного уровня содержания ретикулоцитов происходило лишь на 4,5 сутки после опыта. Изменения в ретикулоцитарной формуле отражали процесс «омоложивания» данных прекурсоров эритроцитов.
Библиографическая ссылка
Хисамова В.А., Ишбульдина К.Р., Габдрахманова И.Д. РЕТИКУЛОЦИТАРНАЯ РЕАКЦИЯ КРОВИ КРОЛИКОВ В УСЛОВИЯХ ОСТРОЙ БАРОКАМЕРНОЙ ГИПОКСИИ // Международный студенческий научный вестник. – 2017. – № 6. ;URL: https://eduherald.ru/ru/article/view?id=17907 (дата обращения: 18.04.2024).