Цель: Изучение влияния препарата дибазол на различные аспекты полового поведения крыс самцов и уровень сывороточного тестостерона в крови.

Задачи исследования.

1. Исследовать влияние дибазола на сексуальные мотивации и копулятивное поведение у крыс самцов с помощью методики Агмо А.

2. Изучить влияние препарата дибазола на процептивное и рецептивное половое поведение крыс-самцов.

3. Определить влияние исследуемого препарата на содержание половых гормонов в крови у крыс-самцов.

Актуальность

Производные бензимидазолов широко и давно используются в клинической практике. Препарат дибазол применяется с середины XX столетия в качестве гипотензивного средства. Установлено также, что наряду с антигипертензивной активностью, препарат обладает иммуномодулирующими и адаптогенными свойствами. Учитывая, что данный препарат может назначаться здоровым людям детородного возраста, сочли целесообразным провести комплекс исследований направленных на изучение репродуктивной токсичности, в которую входят методики изучения полового, сексуального и копулятивного поведения и определение содержания половых гормонов в крови.

Дизайн исследования.

Влияние препарата дибазол на сексуальные мотивации, половое и копулятивное поведение и уровень тестостерона в крови проводили по окончанию курса введения препаратов опытным самцам крыс.

Половое поведение у животных исследовали в установке «открытое поле», модифицированной под «площадку зоосоциальных предпочтений» (ПЗП). В центр площадки за 20 мин. до начала тестирования подсаживали испытуемого самца. Впоследствии, в центральную часть установки помещали испытуемую крысу самку. Наблюдения за животными вели в течение 1 часа при инфракрасном освещении. Отмечали: латентный период половой активности (время от подсадки самки до первого проявления самцом элементов «ухаживания» облизывания, обнюхивания, груминг); длительность половой активности (общий период времени, затраченное самцом на «ухаживание» за самкой и ее покрытий); число «эмоциональных» подходов самца к самке, а также количество покрытий самцом самку.

Изучение сексуальных мотиваций у самцов исследовали по методу Agmo A. В этих экспериментах использовали установку, которая представляет собой прозрачную арену из поликарбоната с прозрачными бортиками, разделенную на 3 отсека. Прозрачность боковых стенок и пола арены позволяет отслеживать поведение животных сверху, сбоку и снизу и, вести запись на компьютерной установке через видеокамеру без присутствия экспериментатора. После тестирования, просматривая видеозапись, оценивали сексуальные мотивации по следующим параметрам:

1. Время, проведенное в зоне стимуляции самца (социальный стимул)

2. Время, проведенное в зоне стимуляции самки (сексуальный стимул)

3. Количество посещений самцом зоны стимуляции самца

4. Количество посещений самцом зоны стимуляции самки

5. Балл предпочтения высчитывали по следующей формуле: время, проведенное в зоне сексуального стимула/ время, проведенное в зоне сексуального стимула+ время, проведенное в зоне социального стимула.

Уровень тестостерона определяли в сыворотке крови с помощью DRG FREE TESTOSTERONE ELISA KIT для твердофазного иммуноферментного анализа in vitro у человека согласно прилагаемой инструкции, предварительной раститровкой набора и подбором оптимального разведения сывороток крыс, выполнением теста на удвоение и теста внутреннего стандарта.

Принцип определения. Определяемый гормон из сыворотки исследуемой или калибровочной пробы связывается с первыми моноклональными антителами к гормону, нанесенными на поверхность лунки. С ним реагируют вторые моноклональные антитела к гормону, конъюгированные с пероксидазой хрена, образуя комплекс. После инкубации несвязанный конъюгат вымывали дистиллированной водой. Связанный фермент определяли количественно с помощью цветной реакции с хромогенным субстратом. Интенсивность проявляемого окрашивания пропорциональна концентрации свободного тестостерона в образце.

Подсчет результатов производится автоматически с помощью многоканального плашетного спектрофотометра ELx800, BioTec, США при длине волны 450 нм.

Результаты и обсуждения.

При изучении сексуальных мотиваций у крыс-самцов, выявлено, что препарат дибазол в дозировке 5 мг/кг и 160 мг/кг способствует трансформированному повышению сексуальных мотиваций у опытных самцов.

Препарат дибазол при 2-х месячном введении крысам-самцам влияет на половое поведение, активирует процептивность, на фоне угнетающего рецептивного поведения в дозе 5 мг/кг, и повышает половую активность при дозе 160 мг/кг.

Действие дибазола неоднозначно влияет на уровень половых гормонов в сыворотке крови. Так, препарат дибазол в дозе 5мг/кг при 2-х месячном введении самцам способствует увеличению уровня тестостерона в сыворотке крови, при приеме дибазола в дозе 160 мг/кг наблюдается обратный эффект. Также можно отметить, что у самцов получавших препарат в дозах 5 мг/кг и 160 мг/кг, наблюдается значительное увеличение прогестерона в крови. В случае определения уровня эстрадиола в сыворотке крови, при приеме дибазола в дозе 5 мг/кг зафиксировано недостоверное снижение гормона, однако при дозе 160 мг/кг уровень эстрадиола повышается